小鼠耳肿胀实验(部分)
1.实验原理
二甲苯为无色澄清液体,涂抹于小鼠耳廓后,由于其刺激作用,可引起鼠耳局部毛细血管充血,通透性增加,导致急性炎症。比较实验组和对照组二甲苯作用后耳肿胀率的差异,以确定受试样品是否具有干预急性炎症(小鼠耳肿胀)的作用。
2.仪器和材料
直径9mm打孔器、致炎剂(二甲苯)、微量加样器、分析天平
3.实验动物
推荐使用近交系雄性小鼠,体重18-22克,每组10-15只。
4.剂量分组及受试样品给予时间
实验设三个剂量组和一个空白对照组,三个剂量组中应包括一个人体推荐量10倍的剂量组,必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30天,必要时可延长至45天。
5.实验步骤
汲取二甲苯30μl,滴加在小鼠右耳外侧面耳廓的中央,让其自由扩散,60分钟后,将小鼠脱颈椎处死,剪下双耳,用9mm直径打孔器在两耳相同部位打下耳片并称重,以两耳重量之差为耳廓肿胀值,计算耳廓肿胀率。
耳廓肿胀率(%)=耳廓肿胀值/对照耳片重量×100%
6.数据处理和结果判定
一般采用方差分析,但需先进行方差齐性检验,方差齐,则计算F值。若F值< F0.05,结论为各组均数间差异无显著性;若F值≥F0.05(即P≤0.05),结论为各组均数间差异有显著性,需进一步使用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计分析。对非正态分布或方差不齐的数据需进行适当的变量转换,待满足正态分布或方差齐的要求后,用转换后的数据进行统计分析;若经变量转换仍不能达到正态分布或方差齐的目的,则改用秩和检验进行统计分析。
结果判定:实验组与空白对照组比较,耳廓肿胀率明显减少,差异有显著性,可判定该受试样品小鼠耳肿胀实验结果阳性。
7.注意事项
二甲苯具有对眼及上呼吸道有刺激作用,操作时,操作者应注意自身的防护。
打下的耳片应及时称重,以避免水分失去而影响实验结果的准确性。
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