大鼠脑卒中(脑缺血再灌注)模型相关药效实验解决方案（部分）
一、模型种类：
大、小鼠、脑缺血及再灌注模型
二、大鼠脑卒中(脑缺血再灌注)模型制备方法：
1、实验动物：SD大鼠 ，雄性，体重：180-200g，周龄：6-7周，动物等级：SPF级
2、实验方法：
大鼠在实验前一天禁食一晚，麻醉后呈仰卧位固定于手术板上，颈部纵行切口约3cm，暴露并钝性游离颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA)，于颈总动脉(CCA)近心端打活结暂时阻断血供，颈外动脉(ECA)打双结并在双结中间用显微剪剪开小口穿入线栓，从双结中间离断颈外动脉(ECA)，调整线栓方向使之进入颈内动脉(ICA)，以颈内动脉(ICA)和颈外动脉(ECA)分叉处为参考位置，线栓插入到预设刻度，感到阻力，提示线栓头部已到达大脑中动脉(MCA)，打结固定线栓。缺血时间30-90min，将线栓拔出，松掉颈总动脉活结，完成。
实验周期：1-7天。
三、神经功能评分：
以Longa5分法为评分标准
0分 无神经缺损症;
1分 提尾时瘫侧前肢内收不能全伸直;
2分 向瘫侧旋转(如视频所示);
3分 行走时向瘫侧倾倒;
4分 不能行走或昏迷;
结果： 术后24小时进行评分，1-3分为有效模型。4分、0分为无效。
四、TTC染色
1、原理：与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。
2、染色方法：取血后立即从左心室插管，快速灌注生理盐水冲洗2min，断头取脑作TCC染色，将大脑从前往后切成5-7个冠状切片，片厚度约为1.8mm，用1% TTC于37℃染色10min后，用组织固定液固定后应用扫描仪进行扫描。并用分析软件进行分析。
五、超声多普勒血流动力学检测(TCD)
超声经颅多普勒血流分析仪是利用电子技术、数字信号处理技术和图像处理技术，脉冲超声波穿透颅骨的薄弱部位，对颅内脑血管的血流进行检测，还可以采用连续超声波对浅表血管内的血流进行检测，能够定量地评价脑血管和浅表血管的供血状态。
六、给药及评价
1、颅内注射给药
2、大、小鼠行为学检测
3、灌胃、腹腔、尾静脉等多途径给药 眼底静脉丛采血
4、小动物核磁成像
5、脑TTC染色，计算梗死面积
6、灌注取脑
7、病理切片 HE染色、尼氏染色、LFB髓鞘染色
8、病理读片，损伤评级
9、免疫组化、免疫荧光、细胞凋亡(Tunel)
10、相关基因、蛋白分析。WB、QPCR
旗下实验室资质
我司旗下实验室具备CMA资质认定及CNAS认可和ISO认证等证书，具体项目是否在资质认定/实验室认可范围内请与工程师确认。
